常见问题

# R0011 的成分尚未公开。# R0011 不含溴化乙锭。提取自聚丙烯酰胺凝胶且经 RNA 染色溶液染色的 RNA 保持完整（指没有观察到任何降解），用这些提取出的 RNA 制备的 cDNA 的克隆效率良好。

小 RNA 标记物 (#R0007) 含有约 6.4 微克 RNA，该 RNA 是 5 种单股 RNA 组成的混合物（分别含 20、30、40、50 和 100 个碱基）。大致来说，每个片断的浓度约为 0.05 mg/ml （各片断的浓度略有不同）。如果您在聚丙烯酰胺凝胶电泳的一个上样孔中加入 1 至 2 微升小 RNA 标记物 (#R0007)，RNA 条带可通过溴化乙锭染色观察到。在这种情况下，您不必使用放射性同位素对标记物进行标记。

一个小 RNA 标记物 (R0007) 中所含的 RNA 总量约为 6.4 微克，因此其浓度约为 0.2 mg/ml。小 RNA 标记物 (R0007) 中含 5 种单股 RNA，分别含 20、30、40、50 和 100 个碱基。由于每种 RNA 的数量经过调整以在电泳时获得良好的清晰度，每种片断的浓度略有不同。应确保这种 RNA 标记物不会用于定量分析。

该系统可成功表达 > 120 kDa 的蛋白质（即 SARS S 蛋白质）。虽然收率可能无法和分子量 <80Kd 的蛋白质一样高，我们能够通过使用更多细胞溶解物来满足客户的蛋白质总量要求，从而对收率进行补偿。

日本爱媛大学的 Yaeta Endo 教授开发出一种新的高效且耐用的无细胞麦芽蛋白质合成系统。通过彻底洗涤小麦胚芽，除去 RNA N-糖苷酶 tritin 和其它抑制剂（如源自胚乳和表达抑制的硫堇、核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶和蛋白酶）。采用提取自麦芽的体外表达不含抑制剂，而且经过优化的表达载体高效又稳定，能够表达全长蛋白质（长度达到 70-80 kDa ）。以下为与麦芽体外表达系统相关的出版物：

1: Sawasaki T, Ogasawara T, Morishita R, Endo Y. A cell-free protein synthesis system for high-throughput proteomics.Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 Nov 12;99(23):14652-7. Epub 2002 Oct 30.PMID: 12409616 [PubMed - indexed for MEDLINE]

2: Sawasaki T, Hasegawa Y, Tsuchimochi M, Kamura N, Ogasawara T, Kuroita T, Endo Y. A bilayer cell-free protein synthesis system for high-throughput screening of gene products.FEBS Lett. 2002 Mar 6;514(1):102-5.PMID: 11904190 [PubMed - indexed for MEDLINE]

3: Morita EH, Sawasaki T, Tanaka R, Endo Y, Kohno T. A wheat germ cell-free system is a novel way to screen protein folding and function.Protein Sci. 2003 Jun;12(6):1216-21.PMID: 12761392 [PubMed - in process]

4: Kigawa T, Yabuki T, Yoshida Y, Tsutsui M, Ito Y, Shibata T, Yokoyama S. Cell-free production and stable-isotope labeling of milligram quantities of proteins.FEBS Lett. 1999 Jan 8;442(1):15-9.PMID: 9923595 [PubMed - indexed for MEDLINE]

5: Madin K, Sawasaki T, Ogasawara T, Endo Y. A highly efficient and robust cell-free protein synthesis system prepared from wheat embryos: plants apparently contain a suicide system directed at ribosomes.Proc Natl Acad Sci U S A. 2000 Jan 18;97(2):559-64.PMID: 10639118 [PubMed - indexed for MEDLINE]

我们使用高免疫原性染色小鼠，这种小鼠不属于用于单克隆抗体生产的 Balb/c 小鼠。我们不采用仓鼠和大鼠。

对于产生的蛋白质，我们采用 ELISA 和蛋白质印迹法筛选杂交瘤。如果您需要其它性能结果，您需要向我们提供相关材料。我们将为您实施检测。

我们将尽力溶解不溶物，包括使用 1.5% 肌氨酸。我们还会尝试将不溶的蛋白质注入细菌内含体以产生抗体。

至少 20 个氨基酸。

如果采用结合多肽使小鼠产生免疫，我们只保证产生的抗体能够识别合成多肽，但我们不保证在天然蛋白质中识别出该多肽序列，原因是合成多肽可能不具有正确的折叠结构。

我们最常制备的是 IgG2a 和 IgG2b 抗体。

是的，有这项服务可供选择。亚诺法无法保证抗体能够识别出细胞溶解物，原因在于：(1) 客户提供的溶解物的质量具有不确定性，且 (2) 细菌中的抗原表达可能和哺乳动物细胞溶解物中表达的蛋白质具有完全不同的构型。

是的。如可获得 cDNA 或质粒 DNA，亚诺法能够免费提供克隆载体；或者亚诺法可采用亚克隆法，此时需要额外支付 200 美元。

是的，客户会收到其要求开发的所有杂交瘤克隆。标准客户制备服务下，客户将收到最多 5 个克隆。如需要更多的克隆，则需要额外付费。

如果您向我们提供 cDNA，我们能将其亚克隆进我们的载体，并通过麦芽体外蛋白质表达系统对其进行表达。

如果抗原是一种多肽，结合前通常 2 mg 就足够了（1 mg 用于 KLH，1 mg 用于 BSA）。如果抗原是一种蛋白质，对于 500µg/小鼠，0.5-1 mg/ml 的浓度通常是足够的。

亚诺法的免疫方案可针对天然蛋白质、重组蛋白质和多肽进行调整。不接受对人员健康有害的抗原。

产生和筛选单克隆抗体时，亚诺法使用的是来自全免疫组库的非融合抗体库，而非骨髓瘤融合（融合率<1%）。

与小鼠单克隆抗体相比，家兔单克隆抗体具有更为广泛的抗体多样性、抗原性、亲合性、专属性和适用性。

这取决于抗原的大小（如多肽 vs. 蛋白质）和序列同系性（如人类 vs. 家兔）。

客户

抗体制备费用是基于里程碑计算的，因此可最大限度地降低客户的风险。

能。

能。

能，包括以下不同种类：Fc、同型Fc、生物素、链亲和素、HRP。

否。质粒是亚诺法的专有技术。

是的。要获得抗体序列，需要支付额外费用，但基于后续重组抗体制备的规模，该项费用可以减免。

是的。

人类 S100B ELISA 试剂盒可测量血清、肝素血浆和脑脊液样本中的总 S100B。其针对 S100 β 亚基、S100 β-β 和 β-α 二聚体反应，不会与 S100 A1、S100 P 和 S100 Z 蛋白质交叉反应。

我们还未在人类 Clara 细胞蛋白质 ELISA 中检测大鼠样本的交叉反应活性。可能可以，但我们没有相关证据。我们即将完成多项分析中的交叉反应性数据收集，包括 Clara 细胞蛋白质 ELISA 检测。

该项检测首选血清和肝素血清。我们不建议使用 EDTA 或柠檬酸盐血浆样本。

正如客户所说的那样，我们的标记方法不是通过醛类结构实现的。以下是我们的标记方法，供您参考。

另外，结合效率几乎达到 100%，且结合收集率超过 90%。

通常，我们从每只 Balb/c 小鼠中可获得 5ml 腹水，每只 SCID 小鼠中则可获得 8-10ml。定制腹水服务基于产生客户所需数量腹水的小鼠数量。不过，由于每个细胞系可能具有独特的生长特征，我们不能保证每个细胞系的收率相同。但对于需要的绝对数量，我们能通过注入更多小鼠来满足要求。

亚诺法要求客户提供其杂交瘤细胞系的培养基信息和生长速率。如果客户有杂交瘤同型 QC 数据，我们也要求获得相关信息。另一方面，我们也能应客户要求为其实施同型检测。

内生未转染细胞溶解物被用作对照样本，用于通过蛋白质印迹法比较产生的抗体和目标蛋白质的反应活性。与转染细胞推算相比，很难知道未转染细胞蛋白质表达的精确数量。而且，转染细胞倾向于大量表达目标蛋白质，这对于抗体检测而言更为可靠。对比未转染细胞溶解物和转染细胞溶解物的抗体的蛋白质印迹图像，同时考虑第一及第二抗体浓度、孵育和曝光时间等因素，以获得最好的实验结果和比较结果。

随货寄出的发票上将包含关于支付细节的建议。以下支付方式均可接受：
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我们不接受汇票或现金。

如果您收到产品后发现存在任何缺陷，请在收到产品后的 10 天内通知我们。我们将立即更换问题产品。如果您收到的产品在实验中无效，您不需要把产品退给我们；不过我们需要您提供相关实验数据，以便执行后续流程。请向我们索取故障排除表并填写；我们将确保您获得我们专业团队的全面支持。