トラブルシューティング

新しい検出バッファをご使用ください。

HRPシグナルを消す恐れのあるナトリウムアジ化物を含むバッファの使用は避けてください。

プライマリ抗体で潜伏期を増長させるか、または4℃で一晩孵化を実行してください。

メンブレンの過剰な洗浄は、プライマリ抗体を洗い流すことがあります。5分間で3回の洗浄を試してみてください。

無脂肪乳は抗原を被覆することがあります。ブロッキングバッファおよび抗体ソリューションで乳量を減少させるか、または異なるブロッキング試薬でそれを代用してください。

転送条件を最適化してください（例えば時間、電流など）。以下のステップに移動する前に、転送手順が完了していることを確認してください

最高のパフォーマンスを求めるには、新鮮な抗体ソリューションを使用してください。

プライマリ抗体のホスト種に対して高めたセカンダリ抗体を使用してください。ポジティブコントロールを使用して、セカンダリ抗体が適切に作用していることを確認してください。

より高い濃度の抗体を使用してください 私たちのプロトコルは、抗体希釈にガイドラインを提供ています。ポジティブコントロールを使用して、プライマリ抗体が適切に作用していることを確認してください。

最も敏感な検出試薬を使用してみてください。

ゲルローディングのサンプル量を増加させてください。レーン当たり25-50μg細胞/組織溶解産物タンパク質を使用してください。レーン当たり最低25μg細胞溶解産物タンパク質をローディングしてください。

状態を高めるには、プロテアーゼ抑制剤を使用してください。

目標タンパク質の発現と関連情報を検索してください。

関連ドキュメントを検索するか、または修飾予測にいくつかの生物情報学的ツールを使用してください。

抗体潜伏期または濃度を減少させてください。コントロールとしてのみセカンダリ抗体でレーンを実行してください。

露出時間を減少させてください。

好ましくない残留抗体を取り除くため、PBSで洗浄回数を増やしてください。

ブロックタイムを延長させるか、または4℃で一晩ブロッキングを実行してください。

Tween 20（洗剤）を洗浄バッファに追加するか、または異なるブロッキングバッファを試してみてください。

ブロック潜伏期を増長させてください。5%脱脂粉乳とTween 20をブロッキングバッファに追加してください。

さらに抗体濃度を希釈するか、または算出を短くしてください。

プライマリ抗体が高められているホスト種のIgGに対してセカンダリ抗体を選択してください。

孵化時間を延長してください。

より長い孵化時間でプライマリ抗体をより高い濃度で使用してみてください

目標タンパク質の組織特定性と関連情報を確認してください。最も敏感な検出試薬を使用してください。

ホルマリン固定によって形成されたタンパク質クロスリンクを破壊する適切な抗原検索方法を使用してください。

キシレンソリューションを更新し、より長い時間でサンプルセクションを脱パラフィン化させてください。

抗体で産出する前に、蛍光顕微鏡で組織スライドを確認してください。蛍光シグナルが検出される場合、蛍光分析法ではなく、他の検出システムを選択してください。

ビオチンアビジン検出システムを使用する場合、未結合アビジンで組織サンプルを前処理してください。

APをラベルとして使用している場合、レバミゾールソリューションで組織サンプルを前処理してください。

プライマリ抗体でそれを孵化させる前に、3%のH2O2で組織サンプルを前処理してください。

セカンダリ抗体によってのみコントロールのレーンを実行してください。

抗体濃度を減少させてください。

孵化時間を減少して、シグナルの発育過剰を防止してみてください。

サブストレイトを追加した後、直ちにプレートを暗所に入れてください。

新しいプレートを使用してください。

新しいサブストレイト試薬を使用してください。

抗体濃度を減少させてください。

ブロックタイムを延長するか、またはより多くの/異なるブロッキングソリューションを使用してください。

他のサンプルまたは試薬によって汚染されることがあります。ウェルのオーバーフローは避けてください。ピペット操作を慎重に行ってください。

ウェルが洗浄バッファで満たされていることを確認し、それぞれのウェルから残るソリューションを完全に取り除いてください。洗浄数を増加させてください。

正しい波長が設定されることを確かめてから、シグナルを測定してください。

ELISAリーダーに対してプレートが十分発育するまで、孵化時間を最適化してください。

より多くの濃縮抗体を使用してみてください。推奨時間で抗体を産出してください

目標タンパク質の発現プロファイルに関する情報を検索してください。使用したサンプル量を増加させるか、またはより敏感な検出試薬を使用してください。

サンプルロードにおいて、ウェルに気泡が存在しないようにしてください。

コーティング手順を確認し、適切なELISAプレートを使用してください。

スライドは、PBSを使用してやさしく洗浄してください。長時間洗浄バッファに浸けたままにしたり、蒸留水に入れたりしてはなりません。

ホルマリンやグルタルアルデヒドといった、異なるサンプル固定法を試してみてください。メタノールは細胞膜の破壊を引き起こすことがあります。

15分間で0.1 Triton X- 100を使用して、セルの透過または孵化時間を増やしてください。

セカンダリ抗体を暗所で保存してください。

プライマリ抗体に対し、セカンダリ抗体が特定していることを確認してください。

ブロックタイムを減らしてください。

サンプルでより多くの細胞を使用するか、または安定したトランスフェクト細胞ラインを使用してみてください。

細胞抽出物を準備し、ウェスタンブロットで細胞の目標タンパク質が存在することを確認してください。

孵化時間を延長してください。

より高い濃度をお勧めします。

各手順の最後にPBSで5分間、完全に洗浄してください。手順を5回繰り返してください。

4℃で一晩、または室温で4時間サンプルを孵化させてください。

セカンダリ抗体が特別に結合していることを確認してください。プライマリ抗体なしでセカンダリコントロールを実行してください。

短時間でプライマリ/セカンダリ抗体で産出してください。

抗体濃度を希釈してください。

PBSの5%ヤギ血清といった異なるブロックバッファを1時間使用してみてください。

固定時間を減少させてください。