Als Immunhistochemie (IHC) wird das Verfahren bezeichnet, mit dem die Lokalisation spezifischer Antigene in Zellen oder Gewebeschnitten anhand der Bindung markierter Antikörper an diese Antigene nachgewiesen wird. Die Antigen-Antikörper-Interaktion kann mithilfe einer Markierung, z.B. einem Enzym, einer Radiomarkierung, einem Fluorophor oder einem kolloidalen Metall, sichtbar gemacht werden. Die IHC ermöglicht die Visualisierung von Verteilung und Lokalisation spezifischer zellulärer Komponenten innerhalb einer Zelle oder eines Gewebes.
Es gibt zwei Verfahren zum immunhistochemischen Nachweis von Antigenen in Gewebe, ein direktes und ein indirektes Verfahren. Das direkte Verfahren besteht aus einer Einschritt-Färbung mit einem markierten Antikörper, der direkt mit dem Antigen in Gewebeschnitten reagiert. Dieses Verfahren ist einfach und schnell, der Nachteil besteht in der geringen Empfindlichkeit. Das indirekte Verfahren erfordert die Anwendung von zwei Antikörpern: einem unmarkierten Primärantikörper, der mit dem Gewebeantigen reagiert, und einem markierten Sekundärantikörper, der mit dem Primärantikörper reagiert. Das indirekte Verfahren ist empfindlicher, da der Sekundärantikörper mit verschiedenen Epitopen auf dem Primärantikörper reagiert und außerdem eine Signalverstärkung ermöglicht. Abnova verwendet zum Antigennachweis in Gewebe das indirekte Verfahren.
10 tissue microarray slides for Alzheimer disease and cancer research.
Service
Abnova offers a complete immunohistochemistry service for researchers. All studies are conducted under R&D conditions and the results are proprietary to the customer.
General Workflow of IHC Service
Customer completes a IHC custom service form (PDF, Excel File) and send to Abnova.
Abnova prepares slides from formalin-fixed and paraffin-embedded tissues.
Abnova performs IHC staining either on slides without pretreatment or with pretreatment, or both.
Abnova performs dilutions of antibody according customer's instruction or performs a serial dilution of 40, 20, 10, 5, 2.5,1.25, 0.675 ug/ml.
Abnova offers the following slide pretreatments. Customer may choose one or more protocols for the pretreatment:
Pretreatment in 1X citrate buffer (pH 6.0), microwave at 750W for 20 minutes, and subsequently cool the samples.
Pretreatment in 1X Tris/EDTA buffer (pH 9.0), microwave at 750W for 20 minutes, and subsequently cool the samples.
Pretreatment in HCl (2N) (pH 0.6~0.9) at room temperature for 10~20 minutes.
Pretreatment in 0.1% trypsin and shake for 25 minutes at 37C.
Immunohistochemistry is a method of detecting the presence of specific proteins in cells or tissues. It is widely used in basic research to understand the distribution and localization of biomarkers and differentially expressed proteins in different parts of a biological tissue.
Rotary microtome is an instrument used to cut the blocks of tissue embedded in paraffin into micro fine slices (known as sections). Microtome is an important device in microscopy preparation, allowing for the preparation of samples for observation under transmitted light or electron radiation.
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